Offre de stage
Thèse
Post-doctorant
Thèse
Fièvre méditerranéenne familiale (FMF)
Proposition 1 Quel est le rôle de la pyrine/marenostrin (M/P) dans le chimiotactisme ?
Une des principales caractéristiques des attaques inflammatoires observées chez des patients atteints de FMF est l’afflux massif de neutrophiles aux sites inflammatoires, ainsi qu’une augmentation de la migration spontanée de ces cellules entre deux attaques. Par ailleurs il a été montré une augmentation de certains médiateurs de la migration telle que la chimiokine IL-8 dans le sérum de patients entre les crises et non traités à la colchicine, le traitement de la FMF. Il est suggéré que la colchicine permettrait la diminution de ces paramètres, suggérant ainsi un dérèglement du mécanisme de migration cellulaire dans la FMF.
Le but de ce projet sera de déterminer l’implication de la protéine en cause (M/P) dans le chimiotactisme des neutrophiles et d’étudier le rôle de la colchicine dans ce processus. Pour analyser le rôle de M/P dans le chimiotactisme des neutrophiles, nous étudierons le chimiotactisme de la lignée cellulaire HL60 différencié en neutrophiles (dHL60) exprimant ou non les siRNA spécifiques de MEFV (le gène responsable de la FMF) et/ou exprimant de façon stable des mutants de MEFV. Nous évaluerons l’activité chimiotactique par l’utilisation de la chambre de Boyden qui permet de quantifier la migration spontanée mais aussi induite (chimiotactisme) par des chimiokines telle que l’IL-8. Nous testerons l’effet de la colchicine sur l’activité chimiotactique des neutrophiles.
Pour plus de détails nous contacter: Isabelle Touitou ou Sylvie Grandemange
Proposition 2 : Quel est le rôle de la pyrine/marenostrin (M/P) dans la résolution de l’inflammation ?
La nature inflammatoire de la FMF laisse penser que M/P, la protéine en cause, agit comme un régulateur de la réponse inflammatoire. Des mutations dans M/P altéreraient cette fonction, ce qui entraînerait une réponse inflammatoire inappropriée et prolongée. Cependant, la nature de la ou les voie(s) de régulation et l'identité des facteurs déclenchant les attaques chez des patients atteints de FMF, ne sont pas encore définies. Une des principales caractéristiques des attaques inflammatoires observées chez des patients atteints de FMF est l’augmentation de l’apoptose, dans les monocytes et neutrophiles après induction par une molécule de reconnaissance de la bactérie E. coli, alors que la phagocytose des monocytes de patients est diminuée.
Nous allons étudier le rôle éventuel de M/P dans une ou plusieurs étapes de la résolution de l’inflammation.
L’inflammation s’arrête seulement si :
1) Les neutrophiles et les monocytes circulants ingèrent le "signal de danger" par phagocytose. Cette étape sera analysée par la quantification par cytometrie de flux (FACS) de l’ingestion du signal de danger (LPS) fluorescent par la lignée monocytaire THP1.
2) Cette ingestion induit la mort cellulaire par apoptose. Elle sera vérifiée par l’observation de la fragmentation de l’ADN et quantifier par FACS.
3) Les macrophages ingèrent les cellules apoptotiques par phagocytose, permettant une sécrétion par les macrophages de cytokines anti-inflammatoires. Nous mesurerons la phagocytose de la lignée dHL60 apoptotique par la lignée THP1 différentié en macrophage, comme en 1).
Pour ces 3 étapes nous utiliserons des lignées cellulaires exprimant ou non les siRNA spécifiques de MEFV et/ou exprimant de façon stable des mutants de MEFV.
Pour plus de détails nous contacter: Isabelle Touitou ou Sylvie Grandemange
Post-doctorant
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